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甲基化檢測實(shí)驗(yàn):DNA甲基化是基因表觀修飾方式之一,真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá),去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。
分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建:分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA的片段的方法。常含有目的基因,用體外重組方法將它們插入克隆載體,形成重組克隆載體,通過轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式,引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增,然后再從篩選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體,可以得到插入DNA的許多拷貝,從而獲得目的基因的擴(kuò)增。
實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(yàn)(real-time PCR),屬于定量PCR(Q-PCR)的一種,以一定時(shí)間內(nèi)DNA的增幅量為基礎(chǔ)進(jìn)行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對(duì)定量??蓹z測mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷貝數(shù)變化。
普通電泳PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)是體外酶促合成特異DNA的片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時(shí)等特點(diǎn)。
透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)是使用為廣泛的一類電鏡。通過發(fā)射電子束從而穿過超薄的樣品,同時(shí)與樣本相互作用,既而形成圖像。透射電鏡具有分辨率高和放大倍數(shù)高的優(yōu)點(diǎn)。其分辨率為0.1~0.2nm,放大倍數(shù)為幾萬到幾十萬倍。目前透射電鏡檢測已經(jīng)廣泛的應(yīng)用到癌癥研究,病毒學(xué)研究,微生物學(xué),細(xì)胞學(xué)研究等生物領(lǐng)域。
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